近期,《神奇动物:格林德沃之罪》电影掀起了一股魔法热潮。如片名所揭示,神奇动物的剧情里充满着各种奇幻的生物,贪吃的鸟蛇、能预测未来的隐形兽、财迷的嗅嗅(小编的最爱,毕竟剧情反转全靠嗅嗅的一双小手)、呼风唤雨的雷鸟等等。但是身为一个生物科研工作者,属于你的神奇动物在哪里呢?下面小编给你介绍一下本期的神奇动物——Cre工具鼠。
什么是Cre工具鼠?
由转基因或基因敲入手段建立,将Cre重组酶整合到小鼠基因组中,可以特异识别重组酶识别位点(例如:LoxP位点),从而使我们需要的flox小鼠发生时空特异性敲除或敲入的小鼠就是我们的Cre工具鼠。
为什么要用到Cre工具鼠
CKO(Conditional Knock Out)小鼠相对于KO(Knock Out)小鼠来说有以下几点优势:
1.可以用于具有胚胎致死性目的基因的研究;
2.可以用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能;
3.通过与控制Cre或Flp表达的其它诱导系统相结合,还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。为了实现各位研究者对于基因的条件性表达,将我们的CKO小鼠与Cre工具鼠交配后即可实现这一目的。
成功的Cre工具鼠长啥样?
首先,能成功表达重组酶。那么能表达重组酶就够了吗?No No No,重组酶在小鼠体内的表达需要符合研究者的实验需要,由特异性启动子在特定的细胞或者组织中驱动重组酶表达,尽可能减少在非目的细胞或组织中发生表达,能满足实验者需求的Cre工具鼠才是一只成功的神奇动物。
常用的重组酶系统有哪些?
首先最为常用的当属Cre-lox系统,是来源于大肠杆菌噬菌体 P1 的重组酶系统,Cre重组酶,可识别特定的一段DNA序列(长为34bp),这段DNA序列我们称它为“ loxp”。两个loxp的方向性非常重要,决定了其之间DNA序列在Cre酶作用下的不同变化。当 DNA 分子上的两个loxp是相同方向时 ,Cre酶的作用下可将两个 loxp 序列之间的DNA片段删除并环化,同时会将loxp 两侧的序列进行修复。 当 DNA 分子上的两个loxp是相对时,Cre酶的作用下可使loxP之间的序列发生完美的倒置。
除了上面说到的Cre-lox系统之外,较为常用的还有Dre-rox系统:与Cre-lox系统类似,由“loxp”变为了“rox”,并且叫做Dre的重组酶会识别rox位点。该种系统可单独使用也可搭配Cre-lox系统使用,实现多功能的基因敲除及过表达。
最后就是诱导型重组酶系统,将经过改造的雌激素受体的配体结合区(ER)引入到重组酶系统中,建立在雌激素类似物Tamoxifen诱导下表达的重组酶系统,如Cre-ERT2或Dre-ERT2等。可以在特定时期诱导实现基因敲除或表达。
转基因好还是KI构建的Cre工具鼠好
转基因小鼠一直以来由于其构建方式的原因,会造成Cre工具鼠重组酶基因容易被沉默或发生异位表达,拷贝数不确定等弊端,会给实验者的实验带来更多的变数和潜在风险。
相比于转基因构建方式,KI(Knock In)方式构建的工具鼠由于插入位点确定、拷贝数确定,可避免位点效应导致的异位表达或表达沉默,外源基因表达成功率高且稳定。
因此,构建工具鼠时可在满足实验需求的基础上尽可能选择KI(Knock In)方式进行构建。
Cre工具鼠的使用
可以用一种工具鼠和我们感兴趣的多种flox小鼠搭配使用,研究不同基因的功能,也可以使用多种工具鼠和我们的flox小鼠搭配使用,进而对目的基因在不同组织或细胞中的表达进行研究,这样也可以有效的降低定制工具鼠的成本。
Cre工具鼠哪里有?
想做条件性敲除但是找不到合适的工具鼠?想做诱导性敲除可是重组酶竟然在没有诱导时也表达?想要定制工具鼠,但是价格实在太高?集萃药康Cre工具鼠,为你省时、省力、省money!